三明前11月100个服务业重点项目 已完成投资122.3亿元

高纯银中可能包含多种杂质元素，应选用合适的沉淀剂分离银基体，从而测试不同的杂质元素。

2.4 云南澳洲坚果园叶片养分状况评价根据澳大利亚澳洲坚果叶片中的养分分级标准与营养元素状况等，对云南澳洲坚果叶片营养进行养分丰缺状况评价。研究表明：叶面喷施硼能够增产，提高澳洲坚果出仁率和一级果仁率及平均果仁重。

土壤交换性镁含量处于适宜高于100mg/kg和低于100mg/kg的样品比例占33%和67%。土壤低磷水平能促进澳洲坚果排根的产生，进而提高对磷的吸收利用，而高磷水平会对排根产生抑制作用。从以上分析可得出云南澳洲坚果园叶片N、P、K和Zn养分处于适宜或丰富状况。土壤有机质含量高于30g/kg和低于20g/kg的样品比例占40%和26%。由于澳洲坚果生长周期长，每年的营养生长和生殖生长需消耗土壤肥力，加上土壤淋溶强烈会导致有机质逐年减少，因此土壤有机质含量＜20g/kg的澳洲坚果园应重视有机肥的施用。

因此，当澳洲坚果叶片和土壤硼含量低时，应该叶面喷施或土施硼肥来增加坐果率，提高产量。一些云南澳洲坚果园，已经出现枝条顶端长出许多细枝，形成丛枝的现象。将每次测定值连成曲线，按下述公式计算荧光曲线下的面积：式中：f00min时的测定值。

1.3 方法1.3.1 体外模拟胃肠道消化参照Alting等报道的方法并稍作修改。样品的ABTS自由基清除能力用Trolox抗氧化当量（TEAC，mol/LTE/g样品）表示，即一定浓度的样品溶液相当于多少浓度的Trolox溶液。将黑色96孔板立即放入酶标仪中，设置温度37℃，激发波长485nm，发射波长520nm，每隔2min振板10s并检测1次，连续测定600min。DMEM培养基，美国Gibco公司。

合成肽CFDV、CVSP、MPFR（纯度＞95%），生工生物工程（上海）股份有限公司。蛋黄中蛋白以高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和肝素等形式存在。

移液器，德国Eppendorf公司EASY-nLC1000液相色谱仪，美国ThermoScientific公司。1.3.2 卵白蛋白及其消化产物体外抗氧化活性测定1.3.2.1 卵白蛋白及其消化产物ABTS+清除能力测定配制7mmol/LABTS溶液和4.9mmol/L的K2S2O8溶液，将二者等体积混合配置得到ABTS储备液。将处于对数生长期的Caco-2细胞以2104cells/孔的密度接种于96孔板中，分别设置空白组、对照组和试验组，每个浓度6个复孔。

1.2 仪器与设备电子天平，瑞士METTLERTOLEDO公司。超净工作台，苏州安泰空气技术有限公司。将96孔板放入酶标仪中，振荡10s后，室温静置5min后，测定反应体系在734nm下的吸光度值。1.3.3.3 卵白蛋白及其消化产物对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用Caco-2细胞按照参考文献的方法进行培养。

1.3.2.2 卵白蛋白及其消化产物ORAC测定配制116nmol/L的荧光素钠溶液和40mmol/L的AAPH溶液。本试验以卵白蛋白及其体外模拟胃肠道消化产物为研究对象，探究卵白蛋白经体外模拟胃肠道消化后的抗氧化活性变化。

测定其ABTS+清除活性和ORAC，评价体外抗氧化活性。96孔板按如下设置加入溶液：空白组：200LPBS、对照组180LABTS工作液和20LPBS以及试验组：180LABTS工作液和20L样品溶液（0.5，1，5和10g/mL），每组3个复孔。

人结肠癌细胞（Caco-2），中国科学院上海细胞库。将每次测定值连成曲线，按下述公式计算荧光曲线下的面积：式中：f00min时的测定值。样品的ABTS自由基清除能力用Trolox抗氧化当量（TEAC，mol/LTE/g样品）表示，即一定浓度的样品溶液相当于多少浓度的Trolox溶液。相关链接：6-羟基-2，胃蛋白酶，荧光素，白蛋白声明：本文所用图片、文字来源《中国食品学报》，版权归原作者所有。目前对卵白蛋白抗氧化性的研究主要集中在酶解或改性前、后体外活性评价。OrbitrapEliteTM组合型离子阱Orbitrap质谱仪，美国ThermoScientific公司。

在黑色96孔板中首先按如下设置加入溶液，空白组：120L荧光素钠溶液和20LPBS。1.3.3.2 H2O2诱导Caco-2细胞氧化损伤模型的建立Caco-2细胞按照参考文献的方法进行培养。

A1对照组的吸光度。用1mol/L的NaOH调pH值至7，加入质量分数4%的胰液（EC3.4.21.4，来源于猪胰腺，酶活力为250units），保持温度37℃和pH7，持续酶解4h。

蛋黄中蛋白以高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和肝素等形式存在。fii，min时的测定值。

卵白蛋白最终对人体的健康益处与其在体内的生物利用度密切相关。以期阐明卵白蛋白经体外模拟胃肠道消化后抗氧化活性变化规律，为后续研究蛋白及其产物在体内消化、吸收提供理论依据。移液器，德国Eppendorf公司。合成肽CFDV、CVSP、MPFR（纯度＞95%），生工生物工程（上海）股份有限公司。

将酶解液离心，在4℃下10000r/min离心10min，收集上清液，-20℃贮存备用。1.3 方法1.3.1 体外模拟胃肠道消化参照Alting等报道的方法并稍作修改。

细胞增殖检测试剂盒（MTS），美国Promega公司。研究表明，鸡蛋中多种蛋白具有抗氧化活性，其中，卵白蛋白作为蛋清蛋白的主要成分，约占54%，是一种由385个氨基酸组成的糖蛋白，含有6个具有二硫键的半胱氨酸残基，是唯一含有游离硫醇基团（SH）的蛋清蛋白，因而卵白蛋白能与自由基直接反应，从而具有较强的抗氧化活性。

将处于对数生长期的Caco-2细胞以2104细胞/孔的密度接种于96孔板中，分别设置空白组、对照组和试验组，每个浓度6个复孔。A2试验组的吸光度。

称取10g卵白蛋白，加入1L蒸馏水配制成质量分数1%的蛋白溶液。评价卵白蛋白生物利用度的体外模型主要是体外模拟胃肠道消化模型，体外模拟消化能够在一定程度上模拟生理状况，并且试验易操作，成本低、周期短。Liu等为改善姜黄素的功能特性，利用卵白蛋白制成卵白蛋白-姜黄素复合物，与纯姜黄素相比，复合物的抗氧化活性提高。DMEM培养基，美国Gibco公司。

倒置生物显微镜，重庆奥特光学仪器有限公司。评价生物利用度有体内和体外两类模型，体内主要是动物模型。

空白组加入80L的培养基，试验组和对照组加入80L细胞悬液，于37℃、5%CO2培养箱中孵育12h后，空白组和对照组加入10LDMEM无血清高糖培养基，试验组分别加入10L终质量浓度为0.01，0.1，1mg/mL的样品溶液，继续孵育12h后，空白组和对照组加入10LDMEM无血清高糖培养基，试验组加入10L终浓度为700mol/L的H2O2溶液，孵育6h后，利用MTS法测定细胞存活率。空白组加入80L的培养基，试验组和对照组加入80L细胞悬液，于37℃、5%CO2培养箱中孵育12h后，各组均加入10LDMEM无血清高糖培养基，继续孵育12h后，空白组和对照组加入10LDMEM无血清高糖培养基，试验组分别加入10L终浓度为400，500，600，700，800，900mol/L的H2O2溶液，孵育6h后，利用MTS法测定细胞存活率。

Net，AUC按下述公式计算：1.3.3 卵白蛋白及其消化产物的细胞抗氧化活性1.3.3.1 卵白蛋白及其消化产物的毒性作用Caco-2细胞按照参考文献的方法进行培养。动物模型虽然能够真实地还原生理条件下的消化过程，但是存在以下问题：实验周期长，成本高，并且由于个体差异问题，容易造成结果的重复性差。